在生物医疗领域，甘油菌种的复苏与保存是确保微生物资源有效利用的重要环节。该过程涵盖了菌种的保存、复苏以及再保存几个关键步骤。以下是详细的步骤和注意事项：

菌种保存

首先，将菌种接种于LB液体培养基中，在对数生长期，当培养体系出现明显的浑浊时，准备进行保存。接下来，配制50%浓度的甘油溶液，该溶液可以通过等体积的蒸馏水与甘油混合获得。在无菌操作条件下，将菌液与50%甘油溶液按1:1的比例混合，使最终甘油浓度达到25%。最后，将该混合液转移至2ml离心管，并在-20°C的冰箱中保存。在这种条件下，菌种的保存有效期可达1年。如果需要进行长期保存，则建议在-70°C或-80°C的条件下冻存，保藏时间通常为2-4年。

菌种复苏

使用前，需将保存的菌种在30°C水浴中进行解冻。解冻后，将菌液接种到适宜的固体培养基上，并在适宜条件下培养24-48小时，以恢复菌种的活性。

再次保存

复苏后的菌种可以在新的液体培养基中继续培养，然后再次进行甘油保存。这一过程确保了菌种的长期保存和可用性，从而保证了生物医疗实验的顺利进行。

注意事项

在整个操作过程中，确保所有工具和容器都经过适当的灭菌处理，以避免污染。保持无菌操作条件至关重要，以防止外部微生物的侵扰。此外，正确的保存和复苏方法对于保持菌种的活性和纯度至关重要。温度对菌种的长期存活影响显著，低温条件有助于延长保存时间。

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