抗体检测通用ELISA操作流程（效价测定）

1. 包被步骤

1. 使用包被缓冲液配制1-10μg/ml的抗原溶液（现配现用）。
2. 在高结合力ELISA板（货号80112）每孔加入100μl抗原溶液，覆以封板膜，室温轻摇孵育2-6小时或在4℃下过夜。
3. 弃去溶液，用洗涤缓冲液洗板2次。

2. 封闭步骤

1. 用封闭缓冲液母液配制工作液，每孔添加300μl，室温轻摇孵育2-6小时或在4℃下过夜。
2. 弃去封闭液并在吸水纸上拍干，板子可立即使用或密封保存于4℃备用。

抗体效价检测

1. 使用抗体稀释液对免疫前/免疫后血清进行梯度稀释（1:100至1:100,000），每孔加入100μl。覆以封板膜，室温轻摇孵育30分钟。
2. 弃去液体，用洗涤缓冲液洗板5次（每次200-300μl，洗涤不充分可能导致高背景）。
3. 配置HRP标记的抗兔二抗（1:5,000-1:20,000），每孔加入100μl（稀释不当会导致显色过弱或背景过高）。
4. 覆以封板膜，室温轻摇孵育30分钟。
5. 弃去液体，洗板5次后拍干。
6. 每孔加入100μl现成TMB底物溶液。
7. 覆以封板膜，室温轻摇孵育至阳性孔出现蓝色（最长15分钟）。
8. 每孔加入100μl终止液，蓝色转为黄色。
9. 在450nm波长下读取吸光度。

注意：所有试剂需使用新枪头及加液槽添加。除特异性抗原/抗体外，ELISA所需的全部试剂均可通过试剂盒获取。

注意事项

1. 本ELISA流程适用于针对纯化抗原（蛋白质或多肽）产生的抗体的定性检测，不适用于血清或其他体液中抗体浓度的定量测定。
2. 本流程默认一抗来自兔源，如使用其他宿主动物，需选用相应的二抗。

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