细胞介绍

HepG2细胞系是一种上皮样形态的细胞，源自一名15岁阿根廷白人男性肝癌患者的肝细胞癌。该细胞能够分泌多种血浆蛋白，包括清蛋白、α2-巨球蛋白、血纤维蛋白溶酶原和铁传递蛋白等。这一细胞系由Wistar研究所获取，适合用作转染宿主。其标志物的表达包括胰岛素和胰岛素样生长因子II（IGFII）。HepG2细胞的生长特性表现为贴壁生长，初期在培养瓶壁形成小岛状结构，随后可能出现多层堆积或悬浮状态。因其对贴壁性强，该细胞系常用于肝细胞功能及病毒模型的研究。

生长特性

HepG2细胞系为贴壁生长，适宜的培养条件为：87% MEM（含NEAA），10%进口胎牛血清，1% L-alanyl-L-glutamine，1%丙酮酸钠，及1%双抗。培养环境设定为95%空气和5%二氧化碳，温度保持在37°C。

传代培养方法

1. 当细胞出现脱落现象时，应将培养液转移到无菌离心管中，进行离心（125g，3-5分钟），以收集悬浮细胞。轻柔去除培养基，将贴壁细胞收集后混匀接种。
2. 用PBS洗涤贴壁细胞1-2次，每次使用3-5ml，随后添加1ml胰酶（0.25%含EDTA），轻轻摇匀后置于培养箱中。1-3分钟后观察细胞变化，当细胞大部分开始脱落时，立即加入5ml的完全培养基中和。
3. 将细胞悬液转移至无菌离心管中，计数并离心收集细胞。使用适量的完全培养基重悬细胞沉淀，调整细胞密度至每毫升0.6-2 × 10^5，转移至培养瓶中静置于培养箱内。

细胞冻存与复苏

1. 当细胞密度超过80%且活细胞比例达95%以上时，执行冻存操作。细胞沉淀使用4°C的冻存液重悬，建议每T25瓶细胞分装为1ml，冻存管置于-80℃冰箱中过夜，之后可转移至液氮中长期保存。
2. 复苏时，将冻管置于干冰中转移至细胞房后，准备完全培养基。快速解冻冻管内容物，之后转移至含3-6ml完全培养基的离心管中，轻轻混合并进行离心去除培养基，调节细胞密度后重新接种到培养瓶中。

常见问题

1. 细胞碎片处理

黑色颗粒可能为细胞分泌泡和细胞器折光，这是细胞特性，无法清除。外部颗粒可通过PBS清洗去除。

2. 空泡现象

此现象在HepG2细胞中是正常的，不会影响细胞生长。

3. 生长缓慢

在适宜条件下，HepG2细胞传代后2-3天可达80%汇合率。如生长缓慢，考虑增加血清至15%-20%。

4. 细胞聚团或不贴壁

血清品牌和培养基pH是HepG2贴壁性的关键因素。使用高质量低内毒素的胎牛血清有助于改善细胞的贴壁性。

5. 漂浮细胞处理

漂浮细胞是正常现象，使用台盼蓝检查活性，若大部分为活细胞可重新接种。

6. 圆形细胞附着

圆形细胞可能是尚未完全贴壁或分裂中的细胞，不需特别处理。

注意事项

1. HepG2对培养条件要求严格，特别是pH值和血清质量，使用低内毒素高质量的胎牛血清有助于细胞的贴壁生长。
2. 复苏后的细胞形态可能不典型，需经过几次传代优化细胞状态。
3. 建议使用优质的胎牛血清进行培养，或选择订购我司配套的MEM完全培养液。
4. 我司提供HepG2无血清专用培养基，欢迎咨询和订购。

文献引用

截至2024年，引用中乔新舟的HepG2相关文献总计72篇，影响因子总共46707。如以下几篇代表性文献：
1. 《Dienediamine: A Safe Surrogate for the Herbicide Paraquat》，期刊：Molecular Plant，影响因子：275。
2. 《Photodegradation of Carbon Dots Causes Cytotoxicity》，期刊：Nature Communications，影响因子：149.193。
3. 《Ubiquitin-Specific Protease 1 Facilitates Hepatocellular Carcinoma Progression》，期刊：Cell Death and Differentiation，影响因子：137.4。
4. 《Site-Specific Ubiquitination of VDAC1 Restricts its Oligomerization》，期刊：Experimental and Molecular Medicine，影响因子：128.5。
5. 《Accumulation of Nanoplastics in Human Cells as Visualized and Quantified》，期刊：Environment International，影响因子：118。