Z6·尊龙凯时 SV40转染人成骨细胞HFOB119的培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：SV40转染人成骨细胞HFOB119
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：DMEM/F12 + 0.3 mg/ml G418 + 10% FBS
传代方法：第一次建议1:2传代；传代情况：2天换液。
备注：用无菌离心管收集培养基，留作过渡对比培养。如对比培养效果不佳，建议直接购买Z6·尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞处理

收到细胞后处理，将其培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方式。收到细胞后，先用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，并在超净台内严格进行无菌操作，将细胞瓶置于335℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续操作。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍照保存（最好拍摄40x、100x、200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据。如未提供照片，默认收到的细胞状态良好。（建议传代后，一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自行配制的完全培养基以便于对比培养，换液后应将瓶盖稍微松动。）

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，将瓶内完全培养液收集至离心管中，留5 ml完全培养基放在335℃、5% CO2孵箱中培养。若细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2 ml至培养瓶中，置于335℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速取出，轻敲培养瓶后加入5 ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出悬液，转移至15 ml离心管中，在1000 RPM下离心5分钟，并弃去上清液，补加1-2 ml完全培养基重悬细胞。
4. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8 ml/瓶，最后放入335℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1 ml至培养瓶中，待细胞回缩变圆后加入5 ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打使其脱落，转移至15 ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1 mlZ6·尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱保存；如需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上后再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），迅速置入335℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，并用75%酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5 ml完全培养基的15 ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀后用5 ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放入335℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

有些细胞贴壁不牢，运输过程中容易发生细胞脱落，这是正常现象。如脱离的细胞较多，可采取以下方式：将培养瓶内的所有培养液收集至离心管中，1000 RPM离心5分钟，收集上清作为过渡培养（后期对比培养），沉淀后加入1-2 ml胰酶，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后加入5 ml完全培养基终止反应，再次离心，弃去上清，加入1-2 ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的培养基至5-8 ml/瓶，最后放入335℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1. 细胞问题可重发的情况及其标准：
   • 运输过程中发生的细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液等，重发。
   • 细胞污染问题，请在收到产品48小时内提供真实的实验结果，核实后重发。
   • 常温发货的细胞静置24小时后，或干冰冻存发货的细胞复苏后24小时，大多数细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发。
   • 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时后未开封出现污染，重发。
   • 细胞活性问题，请在收到产品7天内提供真实的实验结果，使用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后重发。
   • 收到细胞当天以及第2、3天拍照，若3天内未告知，则视为产品合格。4-7天内出现问题需提供前三天照片及详细操作步骤，技术人员判定责任后重发。
2. 不予以重发的情况：
   • 客户造成的细胞污染，不重发。
   • 客户因不正确操作导致的细胞状态不佳，不重发。
   • 非本库推荐的细胞培养体系导致细胞状态不良，不重发。
   • 细胞状态不佳且未提供培养前3天照片的，不重发。
   • 细胞在培养时经过其他处理的，不重发。
   • 收货后2天内未及时告知的，不重发。
   • 视具体情况而定。

如需了解更多信息，欢迎访问Z6·尊龙凯时，为您的研究提供高品质的细胞培养产品。