一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肺泡巨噬细胞NR8383
生长特性：贴壁与悬浮混合生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：F12K + 20% FBS + 1% P/S
传代方法：首次建议1:2传代，2天后更换培养基

二、细胞处理与培养

收到细胞后，待细胞状态良好时，应将培养瓶灌满完全培养液并封好瓶口，以确保细胞的运输安全。在处理前，使用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，然后在超净工作台内进行无菌操作。将细胞瓶放置于37℃，5% CO2培养箱静置3-4小时，以稳定细胞状态。显微镜下观察细胞生长情况并拍照保存（推荐拍摄40x, 100x, 200x放大倍数）。在前三天拍摄的照片将作为重要的参考依据。如未提供照片，将视为细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

1. 对于贴壁细胞：

将培养上清弃去，并用不含钙、镁的PBS洗涤细胞1-2次。
加入约1-2ml 0.25%胰蛋白酶消化液，放置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞的消化状态。
当细胞大部分脱落后，迅速加入5ml以上完全培养基以终止消化。
轻轻吹打使细胞完全脱落，吸出液体并转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml培养基重悬。
按1:2的比例分瓶传代，补充5-8ml新的培养基，放入37℃，5% CO2培养箱中继续培养。

2. 对于悬浮细胞：

方法一：收集细胞，1000 RPM离心8-10分钟，弃去上清，补加1-2ml培养液混匀后，按1:2比例分配至新的含8ml完全培养基的新瓶中。
方法二：采用半数换液法，弃去一半培养基，悬起剩余细胞，按1:2比例转移至新的含8ml完全培养基的瓶中。

b. 细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，用PBS洗涤。
2. 加入约1ml 0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞变化，待细胞回缩后加入5ml完全培养基终止消化。
3. 将悬液转移至15ml管中，1000 RPM离心5分钟，弃去上清，加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞放置于-80℃冰箱，如需转至液氮罐，建议在-80℃存放24小时以上再进行转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管，迅速置于37℃水浴中解冻，待完全解冻后用75%酒精消毒冻存管外壁。
2. 将细胞转移至5ml培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清后，重悬于5ml完全培养基，接种至T25培养瓶，并放置于37℃、5% CO2培养箱继续培养；第二天更换为新鲜的完全培养基。

四、注意事项

运输过程中可能会发生细胞脱落现象，若脱落较多，可将培养液收集，进行离心处理。对于细胞状态不佳的情况，请务必按照上述步骤进行操作。如遇到问题，请按照以下条件协商处理。

五、售后条款

Z6·尊龙凯时提供多种售后保障服务，确保每一位客户的满意。在细胞出现问题时，请根据具体情况进行反馈，我们会第一时间与您沟通解决方案。

以上为大鼠肺泡巨噬细胞NR8383的培养指南，确保能为您的实验提供高质量的细胞资源。